Capítulo 7, Manual de Bioseguridad: Descontaminación

La descontaminación de cultivos y objetos contaminados por agentes biológicos se realiza de forma rutinaria en los laboratorios microbiológicos. La descontaminación es un componente vital de la práctica de seguridad microbiológica y sirve para proteger al personal de laboratorio (así como a otros) de infecciones, así como de la liberación de organismos infecciosos al ambiente exterior. La descontaminación de medios, superficies de trabajo y equipos también es necesaria para evitar la contaminación de organismos cultivados.

La descontaminación de superficies de trabajo, equipos, cabinas de seguridad biológica y otros objetos inanimados con agentes antimicrobianos se denomina desinfección. Varios agentes químicos se utilizan como desinfectantes. Los trabajadores de laboratorio deben recordar que existen peligros asociados con todos estos desinfectantes químicos. Se debe minimizar la inhalación y el contacto con la piel y evitar el contacto con los ojos. Siempre se deben usar guantes apropiados y gafas de seguridad al manipular estos productos químicos.

La susceptibilidad de los microbios a los desinfectantes químicos varía según su estructura física y estado físico (p. ej., estado de esporas más resistentes). Por ejemplo, la pared celular exterior cerosa de las micobacterias proporciona una mayor resistencia. Los virus que carecen de lípidos en la cápside externa los hacen más hidrofílicos y generalmente más resistentes a los desinfectantes químicos que los virus lipofílicos. El orden de resistencia de los microbios a los desinfectantes químicos, desde el más resistente hasta el menos resistente, se presenta en la página siguiente.

La siguiente es una lista de resistencias de los microbios a los desinfectantes químicos, ordenados de más resistente a menos resistente:

* Adaptado de Seguridad biológica: Principios y prácticas, Fleming, DO y Hunt, DL, eds, 4.ª edición (2006), ASM Press, Washington, DC

La información pertinente para algunos de los desinfectantes químicos comunes se resume en formato de tabla al final de este capítulo.

El autoclave utiliza vapor saturado a presión (aproximadamente 15 psi) para lograr una temperatura en el autoclave de al menos 121 °C (250 °F). El autoclave se puede utilizar para destruir bacterias vegetativas, esporas bacterianas y virus. Al descontaminar residuos biopeligrosos, se recomienda que la temperatura de los residuos alcance un mínimo de 115 °C durante un mínimo de 20 minutos. El tiempo total de procesamiento requerido para cumplir con estas condiciones depende de varios factores de carga (ver más abajo); sin embargo, se debe usar un ciclo de autoclave mínimo de una hora cuando se descontaminan desechos biopeligrosos.

Hay tres factores que en combinación determinan la eficacia de la esterilización en autoclave:

Temperatura: el autoclave utiliza vapor a una presión de aproximadamente 15 psi para lograr una temperatura en la cámara de al menos 121 °C. Aunque la cámara del autoclave pueda alcanzar los 121 °C, esto no significa necesariamente que el interior de la carga alcance esta temperatura.

Tiempo: normalmente se recomienda un tiempo mínimo de ciclo de autoclave de veinte minutos a una temperatura de cámara de 121 °C (el tiempo no comienza tan pronto como se inicia el ciclo de autoclave) para la esterilización de artículos limpios. Sin embargo, el tiempo total de procesamiento requerido para lograr la descontaminación depende de varios factores de carga, incluido el contenedor de carga (propiedades de transferencia de calor), la cantidad de agua contenida en la carga y el peso de la carga. Para cargas mayores, se requiere un tiempo de ciclo más largo para garantizar una descontaminación efectiva. Para el tratamiento de residuos biopeligrosos, se requiere un tiempo mínimo de autoclave de 60 minutos. Las exenciones al tiempo mínimo de autoclave de 60 minutos se considerarán caso por caso y deben ser aprobadas por el Oficial de Bioseguridad o el Comité Institucional de Bioseguridad. Las solicitudes de exención deben enviarse al oficial de bioseguridad con un SOP por escrito que describa los desechos biopeligrosos, las condiciones del autoclave, el tiempo del autoclave y el procedimiento de prueba de eficacia del autoclave y la frecuencia de las pruebas. En ningún caso se aprobará un tiempo de autoclave inferior a 30 minutos.

Contacto: la saturación de vapor es esencial para la máxima transferencia de calor. El vapor debe estar en contacto con todas las áreas de la carga. Las bolsas de autoclave y otros recipientes deben dejarse parcialmente abiertos (o permitir la entrada de vapor) para garantizar un contacto adecuado. Los estudios han demostrado que agregar agua al interior de la bolsa mejora el perfil de tiempo y temperatura del ciclo del autoclave, aumentando la eficiencia de esterilización del autoclave.

Existen requisitos específicos para la descontaminación de residuos biopeligrosos antes de su eliminación. Consulte el Capítulo 12 para conocer los procedimientos de autoclave relacionados con desechos biopeligrosos.

Los autoclaves deben ser mantenidos y reparados regularmente por técnicos calificados. Además, la ley del estado de Nevada exige que los autoclaves con un volumen interno superior a 5 pies cúbicos sean inspeccionados anualmente por un inspector certificado. Actualmente, este servicio es realizado sin costo alguno por la aseguradora de la Universidad. Llame a EH&S al 775-327-5040 para programar una autoclave para inspección. Hay información adicional sobre el uso de autoclaves en el Manual de seguridad de autoclaves de Reno de la Universidad de Nevada.

El calor seco es menos eficaz que el calor húmedo (autoclave); requieren mayor temperatura y mayor tiempo de contacto. Sin embargo, el calor seco es preferible al calor húmedo para la descontaminación de materiales anhidros y recipientes cerrados. Esto se debe al hecho de que el componente de humedad del vapor utilizado en un autoclave no penetrará de manera efectiva en materiales anhidros y recipientes cerrados. La temperatura equivalente de calor seco más alta que alcanzarán estos materiales en un autoclave es de 121 °C. La temperatura más alta que alcanzará el material en un horno de calor seco será la temperatura real dentro del horno. Se recomienda una temperatura de 160-180 °C durante 3-4 horas para la descontaminación de residuos utilizando un horno de calor seco.

La tabla es de: Seguridad en el laboratorio: Principios y prácticas, segunda edición (1995), Diane O. Fleming, John H. Richardson, Jerry J. Tulis y Donald Vesley, eds., Sociedad Estadounidense de Microbiología, Washington, DC

concentración: 70-85%